临床基因诊断淋球菌的注意事项

　　目前临床检测淋球菌的基因诊断方法主要采用PCR方法但是该方法在临床检测中应注意几个问题。

　　(1)引物设计 除了以上所列的淋球菌PCR引物外还可从在其它基因上设计但。

　　是引物序列应具有特异性因为细菌的染色体较大许多基因序列并没有搞清楚;同时细菌之间或近或远有一定的同源性而且细菌所含质粒序列间也存在同源性因此设计引物一定要进行基因数据库比较分析同时进行特异性和灵敏性实验从中选择引物进行临床检测。

　　(2)临床标本处理 对临床标本来讲PCR模板要求越纯越好这就要求在采集标本时要取到准确的位置对于无症状患者要适当多采样以保证采集到病原体细菌另外由于临床标本成分比较复杂有时简单处理的标本PCR扩增效果并不理想这可能是由于杂质过多造成的,需要进一步纯化如用酚一氯仿抽提法纯化结果将会好转这种纯化方法比较麻烦,目前已有商品化的DNA纯化试剂盒,可以较简便地从临床标本中提取高纯度的DNA 。

　　(3)PCR产物的检测方法 不久以前临床PCR检测淋球菌几乎都采用电泳的方法进行PCR产物的鉴定该方法存在许多问题如由于肉眼观察的主观性而造成假阳性和假阴性的结果目前用杂交显色法代替电泳法提高了结果判断的特异性和灵敏性。

　　总之PCR方法与LCP方法比传统的培养法在灵敏性和特异性上有了很大的提高时间也大大缩短随着基因诊断技术的不断改进PCR方法与LCP方法在淋球菌的检测将会成为常规的检测方法。

　　(五)药敏试验：在培养阳性后进一步作药敏试验用纸片扩散法做敏感试验或用琼脂平皿稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)用以指导选用抗生素。

　　(六)PPNG检测：β-内酰胺酶用纸片酸度定量法使用Whatman I号滤纸PP-NG。

　　菌株能使其颜色由蓝变黄阳性为PPNG阴性为N-PPNG。